Hydrophobic Interaction Chromatography (HIC)
Принцип использования гидрофобной хроматографии HIC


Гидрофобная хроматография подходит для всех этапов процесса очистки. Примеры применения включают захват высокомолекулярных, очистка моноклональных антител, удаление укороченных видов из полнометражных форм, отделяя активные от неактивных форм и очистка вирусов. HIC образует один из ортогональных методов в классическом подходе к очистки биомолекул зарядом, гидрофобностью и размером в 3 шага протокола. Он дополняет смежные стадии очистки в том, что подвижная фаза, используемая для связывания или элюции белка схожа с теми, в которые необходимы в предшествующих или последующих хроматографиях. Так белки наносятся при высоких и элюируются при низких концентрациях соли, гидрофобная хроматография идеально подходит для использования после ионного обмена или осаждения солью, как показано на рисунке 3

Как правило, образец наносится в высокой концентрации соли и элюировали с градиентом вплоть до буфернго низкого содержания соли. Добавки, такие как этанол, этиленгликоль или аминокислот могут быть добавлены, чтобы повысить производительность в различных способах. В условиях захвата белка, где основной целью является, очистка и концентрирование молекулы-мишени, чаще всего является предпочтительным ступенчатый градиент для элюирования, а не линейный градиент. HIC широко используется в промышленных процессах.
Проблемы в гидрофобной хроматографии
Хотя HIC мощная техника очистки, удачный выбор HIC сред и условий для их использования может быть сложной задачей. В то время как разделение в гель-фильтрации и ионного обмена являются относительно простыми для прогнозирования и модулирования, гидрофобная хроматография является более сложным методом. Опыт показывает, что связывание со смолой трудно прогнозировать. Также оптимальные условия элюции могут зависеть от многих факторов. Иногда выход материала неожиданно низкий из-за неблагоприятных условий, растворителей или денатурации белка-мишени на гидрофобной поверхности. Диапазон добавок, которые могут быть использованы для повышения производительности также усложняет выбор. Сегодня, компания GE Healthcare предлагает широкий спектр HIC смол, охватывающий от сильных к слабым гидрофобным взаимодействиям, на различных матрицах и с диапазоном размеров гранул, чтобы соответствовать большинству работ. Это приводит к большей вероятности достижения успеха в лабораторных условиях и более быстрому пути к оптимизации метода.
Подбор условий для гидрофобной хроматографии
Для достижения полного разделения потенциал HIC в диапазоне применений требует широкий спектр смол с различной гидрофобностью и эксплуатационными свойствами. Это достигается путем варьирования базовых матриц и химической природой лигандов.

На рисунке 9 показаны результаты исследования элюции из шести модельных белков в двумерной матрице. Средний объем удерживания (выраженное в объемах колонки, CV) рассчитывали как меру относительной гидрофобности каждой среды (ось х). Для отображения разрешающей способности, (Y-ось).Среднее разрешение, естественно, определяет размер частиц, но разница в селективности для специфических белков также играет определенную роль. Особенно обратите внимание на улучшенную производительность последнего поколения Capto смолы.

Комментирование закрыто.