инженер-химик.рф

Информационный портал для химиков


Категория: Биохимия

Конъюгаты антигенов и антител с пероксидазой хрена

Пероксидаза хрена или HRP (Horseradish peroxidase) выделяется из корневищ хрена Armoracia rusticana и является гликопротеином с молекулярной массой около 40 кДа. Содержит в качестве кофакторов гем и два иона кальция. Фермент пероксидаза катализирует реакцию, протекающую по схеме: субстрат + H2O2 = окисленный субстрат + 2 H2O Метод конъюгирования основан на использовании полисахаридных цепей фермента для […]

Лиофилизация микробилогических препаратов

ЛИОФИЛИЗАЦИЯ (от греч. lyo — растворяю и phileo — люблю), лиофильная сушка, сублимационная сушка, метод высушивания биологических объектов и пищевых продуктов в замороженном состоянии под вакуумом. При этом вода удаляется из замороженного материала путём испарения льда, минуя жидкую фазу. Лиофилизация (сублимация) широко применяется в ветеринарной, медицинской, биологической практике и пищевой промышленности для длительного сохранения бактерий, […]

Разделение белков по коэффициенту седиментации

Мы уже видели, что центрифугирование является мощным и, как правило легко применимым способом отделения смеси компонентов клеток, но также полезны для разделения и анализа биомолекул. С помощью этой техники, мы можем определить такие параметры, как масса и плотность, узнать что-то о форме молекулы, и исследовать взаимодействие между молекулами. Для того, чтобы вывести эти свойства из […]

Осаждение белков

Реакции осаждения белков. Белки в р-ре и соответственно в организме сохраняются в нативном состоянии за счет факторов устойчивости, к которым относятся заряд белковой молекулы и гидратная оболочка вокруг нее. Удаление этих факторов приводит к склеиванию молекул белков и выпадению их в осадок. Осаждение белков может быть обратимым и необратимым в зависимости от реактивов и условий […]

Тепловая денатурация белков

На начальном этапе очистки для разделения белков иногда используют тепловую обработку. Она эффективна, если белок относительно устойчив в условиях нагревания, в то время как сопутствующие белки денатурируют. При этом варьируют рН раствора, продолжительность обработки и температуру. Для выбора оптимальных условий предварительно проводят серию небольших опытов. В молекулярной перестройке белков при денатурации активная роль принадлежит воде, […]

Диализ белков

Концентрирование и диализ тесно связаны между собой. При диализе низкомолекулярные вещества удаляются из образца и замещаются буфером. Традиционным является способ диализа через целлофановую пленку. В продаже имеются диализные трубки различного диаметра, обычно они не пропускают молекулы крупнее 15 000-20 000 Да. Для более полного удаления низкомолекулярных веществ в процессе диализа необходима смена буферного раствора в […]

Разрушение клеток и экстракция белка

Большая часть белков и ферментов, изученных в ранний период развития белковой химии, были внеклеточными. Причина этого в том, что такие белки сравнительно легко выделялись, внеклеточные белки более стабильны (часто имеют в своей структуре дисульфидные мостики), обладают небольшой молекулярной массой. Именно для этих белков первыми были установлены структуры: для лизоцима, рибонуклеазы, химотрипсина. Однако большинство белков локализовано внутри […]

Хранение белков

Как полученный материал, так и экстракт из него, следует хранить замороженными. При низких температурах, прежде всего, замерзает свободная вода, и кристаллы льда разрушают мембраны и органеллы, но не повреждают белки. Интересно, что при -15° (в бытовых холодильниках) некоторые соли буфера выпадают в осадок, изменяется рН раствора, а в оставшемся незамерзшем концентрированном растворе могут, хотя и […]

Материал для получения белков

Выбор исходного материала зависит от того, какая ставится цель. Если необходимо, например, изучить фермент определенного типа, безотносительно источника, выбирают тот, который содержит большие количества фермента, а сам источник доступен. При выборе организмов того или иного вида обращают внимание на легкость его выращивания. Из животных часто используют крыс, кроликов. Если источником является определенный орган, то берут […]

Оборудование для производства белка

Для экспрессии (наработке) белка нужна клеточная культура. в зависимости от выбора клеточной культуры, необходимо выбрать оборудование для обеспечения жизнедеятельности клеток. Это может быть термостатированный шейкер(качалка), или инкубатор (термостат) для выращивания на матрасах, или ферментер. Существует минимум основного оборудования для лаборатории, в которой проводится очистка ферментов. Спектрофотометр с УФ-лампой, с помощью которого определяют активность ферментов и […]