инженер-химик.рф

Информационный портал для химиков


Тепловая денатурация белков

На начальном этапе очистки для разделения белков иногда используют тепловую обработку. Она эффективна, если белок относительно устойчив в условиях нагревания, в то время как сопутствующие белки денатурируют. При этом варьируют рН раствора, продолжительность обработки и температуру. Для выбора оптимальных условий предварительно проводят серию небольших опытов. В молекулярной перестройке белков при денатурации активная роль принадлежит воде, […]

Диализ белков

Концентрирование и диализ тесно связаны между собой. При диализе низкомолекулярные вещества удаляются из образца и замещаются буфером. Традиционным является способ диализа через целлофановую пленку. В продаже имеются диализные трубки различного диаметра, обычно они не пропускают молекулы крупнее 15 000-20 000 Да. Для более полного удаления низкомолекулярных веществ в процессе диализа необходима смена буферного раствора в […]

Разрушение клеток и экстракция белка

Большая часть белков и ферментов, изученных в ранний период развития белковой химии, были внеклеточными. Причина этого в том, что такие белки сравнительно легко выделялись, внеклеточные белки более стабильны (часто имеют в своей структуре дисульфидные мостики), обладают небольшой молекулярной массой. Именно для этих белков первыми были установлены структуры: для лизоцима, рибонуклеазы, химотрипсина. Однако большинство белков локализовано внутри […]

Хранение белков

Как полученный материал, так и экстракт из него, следует хранить замороженными. При низких температурах, прежде всего, замерзает свободная вода, и кристаллы льда разрушают мембраны и органеллы, но не повреждают белки. Интересно, что при -15° (в бытовых холодильниках) некоторые соли буфера выпадают в осадок, изменяется рН раствора, а в оставшемся незамерзшем концентрированном растворе могут, хотя и […]

Материал для получения белков

Выбор исходного материала зависит от того, какая ставится цель. Если необходимо, например, изучить фермент определенного типа, безотносительно источника, выбирают тот, который содержит большие количества фермента, а сам источник доступен. При выборе организмов того или иного вида обращают внимание на легкость его выращивания. Из животных часто используют крыс, кроликов. Если источником является определенный орган, то берут […]

Оборудование для производства белка

Для экспрессии (наработке) белка нужна клеточная культура. в зависимости от выбора клеточной культуры, необходимо выбрать оборудование для обеспечения жизнедеятельности клеток. Это может быть термостатированный шейкер(качалка), или инкубатор (термостат) для выращивания на матрасах, или ферментер. Существует минимум основного оборудования для лаборатории, в которой проводится очистка ферментов. Спектрофотометр с УФ-лампой, с помощью которого определяют активность ферментов и […]

Ионная хроматография

Ионная хроматография – это высокоэффективная жидкостная хроматография для разделения катионов и анионов на ионообменниках низкой емкости. Широкое распространение ионной хроматографии обусловлено рядом ее достоинств: – возможность определять большое число неорганических и органических ионов, а также одновременно определять катионы и анионы; – высокая чувствительность определения (до 1 нг/мл без предварительного концентрирования; – высокая селективность и экспрессность; – малый объем анализируемой пробы (не […]

Определение загрязнений воздуха

Для определения загрязнений в водухе ВЭЖХ используется реже, чем в воде и почве. Этот метод незаменим при определении в воздухе токсичных высокомолекулярных и высококипящих органических соединений: к ним относятся диоксины, пестициды, полихлобифенилы, ПАУ, фенолы, ароматические амины и имины, азарены (азотсодержащие гетероциклические углеводороды) и их метильные производные. Во всех случаях предварительно загрязняющие компоненты улавливают из воздуха в специальных концентрирующих трубках, и после экстракции […]

Определение полициклических ароматических углеводородов (ПАУ)

Весьма часто для определения ПАУ в водах и почвах используют жидкостную хроматографию. При необходимости одновременного определения средне и малолетучих ароматических углеводородов обычно выбирают обращенно-фазовую высокоэффективную жидкостную хроматографию. Вследствие уникальных свойств и широкой доступности октадецилсиликагелевых (ОДС) обращенных фаз большинство исследований ПАУ выполнено на этих фазах. С уменьшением длины цепи, привитого углеводородного радикала, значения коэффициента емкости быстро снижаются, что существенно усложняет анализ многокомпонентных смесей ПАУ. Так, […]

Определение пестицидов

В современном сельском хозяйстве широко применяются химические соединения, используемые для борьбы с вредными организмами, грибами, сорняками, так называемые пестициды. Наряду с несомненной пользой крупномасштабное производство и бесконтрольное применение пестицидов привело к существенному обострению экологической обстановки. Так как пестициды попадают в организм людей, не имеющих профессионального контакта с ядохимикатами, главным образом, с пищей и водой необходима постоянно действующая система анализа качества сельскохозяйственной продукции, продуктов […]